該試劑盒使用專(zhuān)有染料,可根據線(xiàn)粒體膜電位梯度選擇性累積在線(xiàn)粒體中。線(xiàn)粒體指示劑是一種疏水性化合物,可以很容易地滲透完整的活細胞,并在進(jìn)入細胞后被保留在線(xiàn)粒體中,該熒光線(xiàn)粒體指示劑長(cháng)時(shí)間保留在線(xiàn)粒體中,因為該指示劑帶有定位細胞的基團,這一關(guān)鍵特征顯著(zhù)提高了染色效率。該試劑盒設計十分穩定,需要很少的動(dòng)手操作時(shí)間。它適用于各種熒光平臺,如酶標儀分析、免疫組化和流式細胞術(shù);它廣泛用于多種熒光研究,包括細胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細胞活力、細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優(yōu)化的細胞標記方案。它適用于增殖和非增殖細胞,可用于懸浮細胞和貼壁細胞。
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 價(jià)格 |
C0603 | Cell Navigator 線(xiàn)粒體標記試劑盒 紅色熒光 | 500 Assays | 2544RMB |
樣品分析
1.準備線(xiàn)粒體染色溶液:
1.1將所有組件溫度調至室溫。
1.2通過(guò)將20μLMitolite Red(組分A)稀釋到10mL活細胞染色緩沖液(組分B)中制備染料工作溶液。
注1:對于一個(gè)96孔板,20μL的500X Mitolite Red(組分A)就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite Red。避光,避免反復凍融循環(huán)。
注2:熒光線(xiàn)粒體指示劑的最佳濃度根據具體應用而變化??梢愿鶕囟毎?lèi)型和細胞或組織對探針的滲透性來(lái)修改染色條件。
2.準備和染色細胞:
2.1對于粘附細胞:在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時(shí),加入等體積(例如對于96孔板為100μL,對于384孔板為25μL)的染料加工溶液(來(lái)自步驟1.2)。將細胞在37oC,5%CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液(HH緩沖液)或您選擇的緩沖液(例如濃度為1:1的生長(cháng)培養基緩沖液)替換染料上樣溶液。
注意:如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色,建議增加標記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。
2.2對于懸浮細胞:以1000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱(37℃)生長(cháng)培養基中輕輕重懸細胞沉淀,并加入等體積的染料加工溶液(來(lái)自步驟1.2)。將細胞在37oC,5%CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液(HH緩沖液)或您選擇的緩沖液(例如濃度為1:1的生長(cháng)培養基緩沖液)替換染料上樣溶液。
注1:如果細胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色,建議增加標記濃度或培養時(shí)間以使染料積累。
注2:懸浮細胞可以附著(zhù)在用BD Cell-Tak?(BD Biosciences)處理過(guò)的蓋玻片上,并作為粘附細胞染色(見(jiàn)步驟2.1)。